Una superficie che impedisce l'attacco delle proteine ai pozzetti.
E' indirizzata a tutte quelle procedure che devono evitare qualsiasi modifica dell'attività delle molecole (es. gli enzimi) indotta dal contatto con la superficie del pozzetto in cui avviene la reazione.

Due sono i test condotti per accertare le proprietà di questa superficie Low Binding:

a. Nessuna capacità legante verso le IgG (met. 14)

1. coating: dispensare 100 µl/pozzetto di Rabbit Anti-HIgM (concentrazione di 25 µg/ml in Tampone Carbonato pH 9.6) ed incubare overnight a 4°C.
2. 4 lavaggi con PBS pH 7.2
3. bloccaggio: dispensare 150 µl/pozzetto di BSA 1% in PBS pH 7.2 ed incubare overnight a 4°C.
4. 4 lavaggi con 0.1M PBS pH 7.2 + 0.05% Tween^® 20
5. dispensare 100 µl/pozzetto di Goat Anti- Rabbit IgG biotinilate (concentrazione da 62 a 0.7 ng/ml) ed incubare 1 hr a temperatura ambiente
6. 4 lavaggi con 0.1M PBS pH 7.2 + 0.05% Tween^® 20
7. dispensare 100 µl/pozzetto di Streptavidina-POD (concentrazione 0.16 µg/ml) ed incubare 1 hr a temperatura ambiente
8. 4 lavaggi con 0.1M PBS pH 7.2 + 0.05% Tween^® 20
9. dispensare 100 µl/pozzetto di TMB
10. dopo 30' stoppare la reazione con H₂SO₄ 1 N (100 µl/pozzetto)
11. la lettura viene effettuata a 450 nm dopo 5'

Risultati

b. Nessuna capacità legante verso l'Albumina (met. 25)

1. coating: dispensare 100 µl/pozzetto di Albumina biotinilata alla concentrazione di 20 ng/ml in 3 µg/ml di BSA in 0.1 M PBS pH 7.2 ed incubare overnight a 4°C.
2. 4 lavaggi con 0.1M PBS pH 7.2 + 0.05% Tween^® 20
3. dispensare 100 µl/pozzetto di 0.1 µg/ml Streptavidina-POD ed incubare per 30' a temperatura ambiente
4. 4 lavaggi con 0.1M PBS pH 7.2 + 0.05% Tween^® 20
5. dispensare 100 µl/pozzetto di TMB
6. stoppare la reazione dopo 10' con H₂SO₄ 1 N (100 µl/pozzetto)
7. la lettura viene effettuata a 450 nm

Risultati