test di valutazione delle piastre coattate con Jacalina

Test delle lgA

1. diluire 1:200 in 0,05M PBS pH 7,2 del siero normale contenente 1170 mg/dl lgG, 280 mg/dl lgA, 90 mg/dl lgM
2. Aggiungere 100 µl di siero diluito ai pozzetti di una piastra coattata con Jacalina e, come 0 di reazione, aggiungere ad altri pozzetti 100 µl di 0,05M PBS pH 7,2. Incubare a temperatura ambiente per 30'. Aggiungere le stesse soluzioni ad una piastra coattata con Albumina Bovina (BSA) come confronto per valutare la specificità del legame.
3. Svuotare i pozzetti e lavare 4 volte con 0,1M PBS pH 7,2 + 0,05% Tween^® 20 ,
4. Aggiungere 100 µl/pozzetto di goat anti-human Fc lgA -perossidasi ed incubare 30' a temperatura ambiente
5. Svuotare i pozzetti e lavare 4 volte con 0,1M PBS pH 7,2 + 0,05% Tween^® 20
6. Aggiungere 100 µl di TMB ad ogni pozzetto ed incubare per 15 minuti a temperatura ambiente
7. Bloccare la reazione aggiungendo 100 µl di acido solforico 1 N e leggere la densità ottica a 450 nm.

Si sono ottenuti i seguenti risultati espressi in densità ottica (O.D.)