Confronto tra differenti tipi di strip ad alta capacità legante

Per verificare le prestazioni di differenti tipi di superfici di polistirene abbiamo realizzato uno studio comparativo tra due tipi di strip ad alta capacità legante:
biomat HB
ed uno dei prodotti più diffusi con caratteristiche analoghe.

La procedura utilizzata per questo test è stata studiata per essere il più possibile simile a quella utilizzata dai produttori di kit in modo da dare ai risultati un valore pratico (e.g. torch ELISA kits).

I tipi di molecole utilizzati sono stati sia le IgM che le IgG per la determinazione della Rubella, Cytomegalovirus e Toxoplasma.

Materiali e metodi

I. Preparazione delle strips

Antigeni per Rubella, Cytomegalovirus, Rabbit IgG to Human IgM (DAKO A426) sono stati diluiti in 0,1 M tampone carbonato-bicarbonato pH 9,6 ed i due campioni di strip da testare sono stati coattati nelle medesime condizioni. Il coating è stato effettuato a 4 °C.

Dopo un lavaggio le strip sono state saturate con 0,1 M PBS pH 7,2 contenente l' 1% di Bovine Serum Albumin e quindi incubate overnight a 4 °C.

Dopo un secondo lavaggio le strip sono state essiccate a 37 °C per 2 ore e conservate a 4 °C fino al momento dell'utilizzo.

Tutti i sieri utilizzati provenivano da laboratori ospedalieri ed erano stato controllati per reazione positiva o negativa utilizzando kit commerciali.

II. Test delle IgG

1. 100 µl/pozzetto di campioni diluiti e di calibratori sono stati dispensati in ogni tipo di pozzetto coattato con antigene ed incubati per 30' a temperatura ambiente
2. si è effettuato un ciclo di lavaggi con 0.1M PBS pH 7,2 + 0,05% Tween^® 20
3. 100 µl/pozzetto di goat-anti Human Fc IgG Perossidasi purificate sono stati dispensati ed incubati per 30' a temperatura ambiente
4. si è effettuato un ulteriore lavaggio con 0.1M PBS pH 7,2 + 0,05% Tween^® 20
5. 100 µl/pozzetto di substrato (TMB) sono stati aggiunti ed incubati per 15' a temperatura ambiente
6. la reazione è stata bloccata con l'aggiunta di 100 µl/pozzetto di H₂SO₄ 1 N
7. si è effettuata una lettura a 450 nm

III. Test capture delle IgM

1. 100 µl/pozzetto di campioni diluiti e di calibratori sono stati incubati per 30' a temperatura ambiente nei pozzetti coattati con comuni anti-IgM
2. si è effettuato un ciclo di lavaggi con 0.1M PBS pH 7,2 + 0,05% Tween^® 20
3. 100 µl/pozzetto di un complesso formato dall'appropriato antigene biotinilato purificato e da streptavidina perossidasi sono stati aggiunti ed incubati per 1 ora a temperatura ambiente
4. si è effettuato un ulteriore lavaggio con 0.1M PBS pH 7,2 + 0,05% Tween^® 20
5. 100 µl/pozzetto di substrato (TMB) sono stati aggiunti ed incubati per 15' a temperatura ambiente
6. la reazione è stata bloccata con l'aggiunta di 100 µl/pozzetto di H₂SO₄ 1 N
7. si è effettuata una lettura a 450 nm

Analisi dei dati

I dati ottenuti dai due tipi di campioni sono stati processati nel seguente modo:

i risultati sono raccolti nelle seguenti tabelle

I risultati in tabella concordano con quelli ottenuti dal laboratorio ospedaliero.

Discussione dei risultati

L'analisi dei dati esposti nelle tabelle A e B mostra:

• una capacità legante pressoché uguale dei due campioni.
• la capacità di entrambi i campioni di ottenere un legame specifico tra la proteina coattata e quelle da esaminare:
  il 100% dei risultati dei nostri test (su 232 sieri, 94 positivi e 128 negativi) è stato confermato dimostrando la sensibilità e la specificità di entrambi i campioni con tutti i tipi di sieri
• il risultato dell'analisi di regressione, il cui valore di accettabilità è stato fissato a R ≥ 0.95
  è stato pienamente rispettato
• l'oscillazione dei valori e dei coefficienti ottenuti dall'equazione (1):
  a    che non deve scostarsi sostanzialmente da 0
  e
  b    il cui valori sono contenuti tra 0,8 ≤ b ≤ 1,2

dimostrano la stretta corrispondenza dei risultati.